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    2. Your Good Partner in Biology Research

      酵母表达纯化服务

      酵母蛋白表达系统是一种高经济性的真核表达系统,可分泌表达表达也可胞内表达。

      酵母表达外源基因具有一定的翻译后加工能力,所表达的外源蛋白质具有一定程度上的折叠加工和糖基化修饰,性质较原核表达的蛋白质更加稳定,特别适用于真核基因表达和功能蛋白的制备。

      酵母分泌表达可以将表达的外源蛋白分泌到细胞外基质中,因此更容易获得高纯度蛋白。

      酵母表达系统具有的诸多优势使其研究和应用越来越广泛。

      系统优势

      • 无自产内毒素;
      • 产物可翻译后修饰:糖基化、磷酸化、酰酯化等,蛋白具有生物活性的可能性更高;
      • 产物可正确折叠和高效分泌;
      • 性质较原核表达的蛋白质更加稳定,特别适合于表达和制备具有功能的蛋白:如结核类蛋白、防御素类蛋白、白介素蛋白及细胞因子等。

      服务优势

      • 无风险定制,不成功不收费;
      • 特有的PickRight技术,转化后免筛选直接可获得高表达量菌株,相比传统筛选节省5-10个工作日;
      • 高产量:摇瓶培养条件下高达100mg/L;
      • 高性价比:价格低至5200元起;
      • 货期短:最短35工作日即可交付。

      我们承诺

      无风险定制,不成功不收费

      注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。

      服务内容

      步骤 服务项目 服务说明 华美生物特色 周期
      1 表达载体构建
      密码子优化全基因合成 多载体优化
      为了提高的表达成功率以及获得更高表达量,除常规N端融合表达蛋白外,我们还提供C端融合标签,在确保纯度的同时使其具有活性可能更高。
      5-10工作日
      PCR扩增产物酶切连接到pPic9k,pPic3.5k,pPiczαA等载体上
      转化TOP10宿主
      获得测序正确的重组质粒
      2 转化及菌株鉴定
      重组质粒大量制备 高拷贝筛选
      通过不同载体特有的筛选标记进行多轮筛选,逐步得到表达量最高的菌株。
      铜离子胁迫专利
      转化后免筛选直接可获得高表达量菌株,时间相比传统筛选减少5-10工作日。
      10-13工作日
      线性化重组质粒
      电击转化至GS115、X33、KM71等宿主
      PCR鉴定挑选阳性菌株
      用遗传霉素G418、Zeocion等抗生素进行多拷贝子筛选,获得高拷贝子
      3 小试及放大表达纯化
      小试表达筛选(20-40株) 7-12工作日/15-25工作日(特色纯化)
      定株,优化表达条件
      放大培养
      通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白 多条件纯化策略(可选)
      完善的DOE方案,利用AKTA对离子交换、疏水等层析条件进行摸索,锁定最适纯化策略。
      4 其他(可选)
      通过酶切去除标签或采用无标签载体表达 灵活的附加服务(可选)
      提供多种附加服务,客户可根据实验需求灵活选择
      3工作日
      提供无菌过滤及内毒素去除服务 2工作日
      5 质控
      蛋白浓度、纯度等检查,并提供QC报告 详细的质控报告
      为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告
      3-5工作日
      总时间 25-40工作日

      特色表达体系

      ● pPic9k-JT质粒+GS115菌株高效表达

      载体特色

      • 携带有AOX1强启动子,含有alpha分泌因子可高效分泌表达;
      • 无缝克隆连接不惧任何内切酶位点;
      • 多个线性化位点:SalⅠ,SacⅠ,BglⅡ;
      • 原核阶段可进行Amp和Kan双抗性筛选阳性菌株;
      • 真核阶段可进行His+和G418筛选高表达菌株;
      • 改造过的多克隆位点,克隆不受目的基因中潜在的核酸内切酶位点限制;
      • 载体自带his 标签,方便克隆与纯化。

      ● pPic9k-SUMOSTAR质粒+GS115菌株高效表达

      载体特色

      • 携带有AOX1强启动子,含有alpha分泌因子可高效分泌表达;
      • 含有SUMOSTAR融合蛋白,具有很强促表达能力;
      • 无缝克隆连接不惧任何内切酶位点;
      • 含有EK酶切位点,酶切可得到无标签蛋白;
      • 多个线性化位点:SalⅠ,SacⅠ;
      • 原核阶段可进行Amp和Kan双抗性筛选阳性菌株;
      • 真核阶段可进行His+和G418筛选高表达菌株;
      • 改造过的多克隆位点,克隆不受目的基因中潜在的核酸内切酶位点限制;
      • 载体自带his 标签,方便克隆与纯化。

      案例展示

      案例1: 酵母表达系统表达高纯度蛋白

      难点:酵母胞内表达,破菌后纯化,可以看出裂解液中杂蛋白非常多(泳道1),目的蛋白非常不明显,经过酵母系统特有的层析系统一次纯化,用SDS-PAGE检测看不到杂带,纯度达到95%以上(泳道6-7)。

      泳道1:裂解液
      泳道2:上样穿透液
      泳道3:Marker
      泳道4-7:不同梯度洗脱下来的目的蛋白

      泳道1:裂解液
      泳道2:上样穿透液
      泳道3:Marker
      泳道4-7:不同梯度洗脱下来的目的蛋白

      特点:酵母分泌表达,蛋白表达后直接分泌到培养基中,基本无杂蛋白,本身纯度就高达90%以上,通过纯化主要是去除色素及培养基中其他残留物质,只留下在适宜缓冲中的目的蛋白。

      泳道1:发酵液上清
      泳道2:Marker
      泳道3:上样穿透液
      泳道4:洗脱下来的目的蛋白


      案例2: 酵母表达系统表达大分子量蛋白

      难点:700氨基酸以上,81kDa,为了得到较高纯度,选择分泌载体进行表达,成功表达并分泌出来。

      N-terminal GST-tagged

      泳道1:发酵液上清
      泳道2:上样穿透液
      泳道3:洗脱下来的目的蛋白
      泳道4:Marker


      案例3: 酵母表达系统表达小分子蛋白

      难点:46氨基酸,7kDa,分子量非常小,相对来说不太容易检测及浓缩,从SDS-PAGE检测图来看表达、纯化、收集都非常成功。

      泳道1:发酵液上清
      泳道2:洗脱下来的目的蛋白
      泳道3:Marker

      难点:36氨基酸以上,4kDa,分子量非常小,而且这个客户要求切除标签,在分子量本身就很小的情况下切除标签是非常有难度的,但我们经过一系列处理后成功将标签切除,且WB用标签抗体检测目的蛋白中不含蛋白标签,最终得到了高纯度、小分子量的无标签蛋白。


      案例4:酵母表达系统表达N-型糖基化修饰蛋白

      特点:接近天然蛋白的修饰,尤其是糖基化修饰在酵母表达系统特别明显,用SDS-PAGE检测呈弥散状条带且偏大,经过去N-型糖基化修饰的Endo H酶消化,带型变实且大小与理论值吻合。

      泳道1:纯化后的目的蛋白(N-型糖基化修饰)
      泳道2:经Endo H去糖基化修饰后的蛋白
      泳道3:Marker

      联系信息

        电话:027-87002556

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      武汉华美生物工程有限公司成立于2007年12月,是一家集科研、生产、销售为一体的生物高新技术企业。并形成了以CUSABIO为品牌的ELISA试剂盒、蛋白、抗体等多种优质产品,远销欧美日德等九十多个国家。
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